제1장 서론(INTRODUCTION) = 18
제1절 연구개발의 필요성(SIGNIFICANCE OF RESEARCH AND DEVELOPMENT) = 18
1. 연구개발의 경제·사회·기술적 필요성(SIGNIFICANCE IN TECHNICAL, ECONOMICAL, SOCIAL ASPECT) = 18
가. 기술적 측면(IN TECHNICAL ASPECT) = 18
나. 경제·산업적 측면(IN ECONOMICAL, INDUSTIRAL ASPECT) = 19
다. 사회·문화적 측면(SOCIAL, CULTURAL ASPECT) = 20
2. 지금까지의 연구개발실적(THE STATE-OF-ART OF R&D) = 21
가. 국외의 경우(DOMESTIC) = 21
나. 국내의 현황(FOREIGN) = 21
3. 현기술상태의 취약성(TECHNICAL DIFFICULTY) = 22
4. 앞으로의 전망(FUTURE PROSPECT) = 23
5. 기술도입(TECHNOLOGY TRANSFER) = 24
제2절 연구개발목표(THE AIM OF RESEARCH) = 24
제2장 국내의 기술개발현황(THE STATE-OF-ART OF TECHNOLOGY) = 25
제1절 연구사례의 조사(CASE STUDY) = 25
1. 외국의 경우(FOREIGN) = 25
2. 국내의 경우(DOMESTIC) = 26
3. 조사연구개발 사례의 평가(EVALUATION OF CASE STUDY) = 27
제2절 세부기술사항의 검토분석(TECHNOLOGY ANALYSIS) = 27
1. 국내외 기술수준비교(COMPARATIVE ANALYSIS OF TECHNICAL LEVEL) = 28
2. 공정단위별로 주요기술사항 및 그 기술수준의 분석평가(ANALYSIS OF PROCESS UNIT) = 28
3. 기존공정방법, 기술의 사례(PREVIOUSLY ESTABLISHED PROCESS) = 29
4. 주요관련기술의 검토(EXAMINATION OF MAJOR RELATED TECHNOLOGY) = 29
제3절 특허 및 기술도입과의 중복여부에 대한 검토, 분석(OVERLAPPING OF TECHNOLOGICAL TRANSFER AND PATENTS) = 30
1. 관련기술의 특허내용과 차이점 비교(DIVERGENCE IN PATENTS) = 30
2. 관련기술도입 내용과 차이점 비교(DIVERGENCE IN TECHNOLOGICAL TRANSFER) = 30
제3장 연구개발수행 내용 및 결과(THE CONTENT AND RESULT OF RESEARCH PERFORMANCE) = 31
제1절 이론적, 실험적 접근방법(THEORETICAL, EXPERIMENTAL APPROACH) = 31
1. 재조합 CHO 세포배양 및 EPO의 생산증진연구(THE CULTURE OF RECOMBINANT CHO CELL AND THE PRODUCTION OF EPO) = 31
가. 연구의 방향(THE AIM OF RESEARCH) = 31
나. 연구개발목표를 향한 접근방법 및 최근결과(APPRACHING METHODS AND RECENT RESULT) = 31
다. 기술정보수집 및 전문가 확보를 통한 문제점 해결(COLLECTION OF INFORMATION AND CONSULTING FROM EXPERTS) = 33
2. EPO의 당쇄구조분석 연구(STRUCUTRAL ANALYSIS OF OLIGOSACCHARIDE OF EPO) = 33
가. 연구의 배경(BACKGROUND OF RESEARCH) = 33
나. 연구의 방향(AIM OF RESEARCH) = 34
다. 연구개발목표를 향한 접근방법 및 문제점(APPROACH METHODS AND PROBLEMS) = 35
라. 기술정보수집 및 전문가 확보를 통한 문제점 해결(SOLUTIONS) = 36
제2절 연구개발 추진체계(THE SYSTEM OF R&D SYSTEM) = 37
제3절 연구내용 및 결과(RESULTS) = 38
1. 총론(OVERALL INTRODUCTION) = 38
가. 재조합 Erythropoietin(EPO)(Recombinant Erythropoietin(EPO)) = 38
(1) 분자적 특성과 기능(Molecular characteristics and Functions) = 38
(2) EPO의 치료적인 이용(Therapeutic Use of EPO) = 39
나. 재조합 당단백질의 생산증가(Enhancement of Production of Recombinant Glycoprotein) = 40
(1) 부티르산이 동물세포에 미치는 효과(Effect of Sodium butyrate on Mammalian Cells) = 40
(2) 부티르산이 유발하는 예정사의 특징과 그 억제제(Apoptotic Feature of Sodium butyrate and Anti-apoptotic Agents) = 40
(3) N-Acetylcysteine과 그 외 다른 환원제(N-Acetylcysteine and Other Reducing Agents) = 41
다. 환원제가 EPO의 당쇄구조에 미치는 효과(Effect of Reducing Agent on EPO Glycosylation) = 42
(1) EPO의 당기질(Carbohydrate Structures of EPO) = 42
(2) 당쇄구조에 영향을 미치는 배양조건(Culture Condition Affecting Oligosaccharide Structure) = 42
2. Apoptotic Chinese Hamster Ovary 세포에서 재조합 EPO의 생합성에 N-Acetylcysteine이 미치는 효과(Effect of N-Acetylcysteine in Biosynthesis of Recombinant EPO in Apoptotic Chinese Hamster Ovary Cells) = 43
가. 서론(INTRODUCTION) = 43
나. 재료 및 방법(MATERIALS AND METHODS) = 44
(1) 시약 및 배지(Chmicals and Medium) = 44
(2) 세포주 및 배양조건(Cell Line and Culture Conditions) = 44
(3) 세포수 계산(Enumeration of Cells) = 44
(4) Apoptosis 여부 평가(Assesment of Apoptosis(Apoptosis)) = 44
(5) 절편화된 DNA의 정량(Quantification of Fragmented DNA) = 45
(6) EPO 분석(EPO Assay) = 45
다. 결과(RESULTS) = 45
(1) Apoptosis 여부평가(Assesment of Aopotosis) = 45
(2) Apoptosis의 진행(Progression of Apoptosi) = 46
(3) 세포의 예정사에 NAC가 미치는 효과(Effect NAC on Apoptotic Death of Cells) = 46
(4) 재조합 EPO의 생합성에 NAC가 미치는 효과(Effect of NAC on the Biosynthesis of Recombinant EPO) = 46
라. 고찰(DISCUSSION) = 52
3. 황환원제에 의한 재조합 EPO의 분비속도 증가(Increased Secretion of Recombinant EPO by Thiol Reducing Agents) = 53
가 서론(INTRODUCTION) = 53
나. 재료 및 방법(MATERIALS AND METHODS) = 54
(1) 시약 및 배지(Chemicals and Medium) = 54
(2) 세포주 및 배양조건(Cell Line and Culture Conditions) = 55
(3) EPO 정량(Quantitative Assay of EPO) = 55
(4) 대사표지 및 추적조건(Metabolic Labeling and Chase Condition) = 55
(5) 면역침전(Immunoprecipitation) = 56
(6) SDS-polyacrylamide Gel Electrophoresis(SDS-polyacrylamide Gel Electrophoresis) = 56
다. 연구결과(RESULTS) = 56
(1) 배지에 첨가된 항환원제에 의한 EPO의 생산증가(Increased Production of EPO in Thiol Reducing Agent Supplemented Media) = 56
(2) 환원제를 다양한 농도로 처리했을 때의 EPO 생산(Production of EPO in Various Concentration of Reducing Agents) = 60
(3) 황환원제에 의한 EPO의 분비증가(Thiol Reducing Agents Increase Secretion of EPO) = 60
라 고찰(DISCUSSION) = 65
4. 황환원제인 N-Acetylcysteine이 재조합 EPO의 당쇄구조에 미치는 효과(Effect of Thiol Reducing Agents, N-Acetylcysteine, in Glycosylation of Recombinant EPO) = 68
가. 서론(INTRODUCTION) = 68
나. 재료 및 방법(MATERIALS AND METHODS) = 69
(1) 재료(Materials) = 69
(2) 배양조건 및 배양액(Culture Conditions and Culture Supernatant) = 69
(3) 재조합 EPO의 분리정제(Purification of Recombinant EPO) = 69
(4) 재조합 EPO의 N-linked 당쇄준비(Preparation of N-linked Oligosaccharide from Recombinant EPO) = 70
(5) 2-Aminobenzamide(2-AB) 표지(2-Aminobenzamide(2-AB) Labeling) = 70
(6) HPLC를 이용한 당쇄구조 분석(HPLC Analysis of Oligosaccharides) = 70
(7) MALID-TOF-MS 분석(MALDI-TOF-MS Analysis) = 71
다. 결과(RESULTS) = 71
(1) 상업적으로 판매되는 standard EPO(Recormon)의 당분리(Release of Oligosacchride of Commercial Standard EPO(Recormo n( R) )) = 71
(2) 2-Aminobenzamide 표지와 MonoQ 크로마토그래피(2-Aminobenzamide Labeling and MonoQ Chromatography) = 74
(3) GU값 결정 및 MALDI-TOF(GU Assignment and LALDI-TOF) = 74
(4) 재조합 EPO의 분리정제(Purification of Recombinant EPO) = 83
(5) 배양중에 NAC 첨가여부에 따른 EPO의 당쇄구조 비교연구(Comparative Study of Oligosaccharide Structure from EPO Produced in Culture with or without NAC) = 83
라. 고찰(DISCUSSION) = 91
5. 결론(OVERALL CONCLUSION) = 92
제4장 연구개발목표 달성도 및 대외기여도(THE ACHIEVEMENT AND CONTRIBUTION OF R&D) = 93
제5장 연구개발결과의 활용계획(THE PLAN OF APPLICATION OF THE RESULTS) = 94
제6장 참고문헌(REFERENCE) = 95
