제1장 서론: 연구개발의 경제·사회·기술적 필요성(Introduction) = 23
제1절 기술적 측면(The aspect of technology) = 23
제2절 경제적 측면(The aspects of economy) = 25
제3절 사회·문화적 측면(The aspect of society and culture) = 26
제2장 국내외 기술 개발 현황(Domestic and abroad current status) = 27
제1절 외국의 경우(Abroad current status) = 27
제2절 국내의 경우(Domestic current status) = 27
제3절 조사연구개발 사례에 대한 평가(The evaluation of research and development) = 28
제3장 연구개발수행 내용 및 결과(Research scope and results) = 29
제1절 Reactive gliosis 형성기전 연구(The study of Reactive gliosis formation) = 29
1. 연구수행 방법(Research methods) = 29
가. 실험재료(Materials) = 29
나. 실험방법(Methods) = 29
(1) Primary astrocytes culture = 29
(2) NYU device를 통한 척수신경 외상(The spinal cord injury by NYU device) = 30
(3) Reactive gliosis 방지 약물 투여(Treatment of inhibitory compound for reactive gliosis) = 30
(4) Immunohistochemistry = 30
(5) Preparation of cell lysates and Western blot analysis = 31
2. 연구수행 내용 및 결과(Results) = 31
가. 성상세포에서의 GFAP immunoreactivity의 증가는 C a++ 의 유입과 calpain Ⅰ의 활성화에 따른 acidic pH에 의해 유도된다(The GFAP immunoreactivity was increased by C a++ influx and calpain I activation caused by acidic pH in astrocytes) = 31
나. 척수신경 외상 후 일어나는 reactive gliosis는 calcium influx와 calpain Ⅰ의 활성화에 의해 매개된다.(Reactive gliosis was mediated by calcium influx and calpain I activation after spinal cord injury) = 36
제2절 척수신경 외상 후 세포퇴화에 관한 signal transduction pathway(s) 규명연구(The study of signal transduction pathway(s) about neurodegeneration after spinal cord injury) = 40
1. 척수신경 외상 후 세포사멸과정에서 TNF-α의 역할과 signal transduction pathway 규명(Study of the signal transduction pathway and the role of TNF-α in apoptosis after spinal cord injury) = 40
가. 연구수행방법(Research method) = 40
(1) 실험재료(Materials) = 40
(2) 실험방법(Methods) = 40
(가) NYU device를 통한 척수신경 외상(The spinal cord injury by NYU device) = 40
(나) Pharmacological treatment = 41
(다) Tissue preparation = 41
(라) Histological staining nuclei = 41
(마) TUNEL-staining = 42
(바) Immunohistochemistry = 42
(사) Subcellular fractionation = 42
(아) Western blot analysis = 43
(자) Electrophoretic mobility gel-shift assay(EMSA) = 43
(차) Nitric Oxide(NO) measurement = 44
(카) DNA laddering = 44
(타) RNA extraction and RT-PCR = 44
나. 연구수행 결과(Results) = 45
(1) 척수신경 외상 후 세포사멸 과정에서 TNF-α는 external death signal로 작용한다(TNF-α act as external death signal in apoptosis after spinal cord injury) = 45
(2) 척수 외상 후 TNF-α에 의한 신경세포사멸의 signal transduction pathway 규명(Identification of signal transduction pathway by TNF-α in apoptosis after spinal cord injury) = 52
2. 척수 외상 후 증가되는 TNF-α가 neuronal cell line에 미치는 영향 및 신호전달체계 규명(The effect on neuronal cell line by increased TNF-α and identification signaling pathway after spinal cord injury) = 61
가. 연구수행 방법(Methods) = 61
(1) PC 12 cell의 배양조건과 분화조건의 확립(Establishment of the condition for culture and differentiation in PC12 cell) = 61
(2) TNF-α에 의해 유도되는 Apoptosis의 정량적 확인(The quantity of apoptosis caused by TNF-α) = 61
(3) Western blotting = 61
(4) 세포내 TRAF2의 과 발현(The overexpression of TRAF2 in PC12 cell) = 61
(5) TNF-α에 의한 Bcl-2 발현 양 증가 확인(Bcl-2 expression was increased by TNF-α) = 61
나. 연구수행결과(Results) = 61
(1) PC12 세포의 신경세포로의 분화유도 조건 확립(Establishment of the condition for differentiation in PC12 cell) = 61
(2) 분화된 PC12 세포에서 TNF-α에 의한 apoptosis 유도조건 확립(Induction of apoptosis by TNF-α in PC12 cell) = 63
(3) TNF-α에 의한 p38 MAPK의 활성화 여부 확인(p38 MAPK activation by TNF-α) = 63
(4) p38 MAPK의 TNF-α에 의해 유도되는 apoptosis 관여여부 확인(Involvement of p38 MAPK activation caused by TNF-α) = 63
(5) PC12 세포내의 TRAF2 과 발현 확인(TRAF2 overexpression in PC12 cell) = 64
(6) TRAF2 과 발현시 TNF-α 자극에 의한 p38 MAPK의 활성화 변화 확인(p38 MAPK activity was modulated by TNF-α stimulation under TRAF2 overexpression condition) = 64
(7) PC12 세포내의 TNF-α에 의한 anti-apoptotic 단백질들의 신호전달 기전의 확인(The signaling pathway of anti-apoptotic proteins by TNF-α in PC12 cell) = 64
3. In vitro system에서 에스트로젠 및 에스트로젠 대체 천연물질의 중추신경 세포사멸방지 연구(The study of anti-apoptosis effect on estrogen and estrogen related natural compound in in vitro system) = 70
가. 연구방법(Methods) = 70
(1) Primary cell culture = 70
(2) Electrophysiological recordings = 70
나. 연구결과(Results) = 71
(1) 에스트로젠의 세포막 칼슘이온 통로에 대한 빠른 효과(Rapid effect on membrane calcium ion channel by estrogen) = 71
(2) Ginseng total saponins(GTS)-mediated inhibition of C a++ currents = 75
제4장 연구개발목표 달성도 및 대외 기여도(Achievement and contribution) = 77
제5장 연구개발결과의 활용계획(Application of study) = 79
제6장 참고문헌(References) = 81
