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보고서 초록
요약문
SUMMARY
CONTENTS
목차
제1장 연구개발과제의 개요 11
제1절 연구개발의 목적 11
제2절 연구 개발의 필요성 (기술적/경제산업적/사회문화적 측면) 12
기술적 측면 12
경제.산업적 측면 12
사회.문화적 측면 12
제3절 연구의 범위 13
1. Buforin IIb의 in vitro 항암력 측정 13
2. Buforin IIb의 in vivo 항암력 측정 13
3. Buforin IIb의 암세포투입기작 규명 13
4. Buforin IIb의 암세포표면 작용부위 탐색 13
5. Buforin IIb의 암세포내 작용기작 규명 13
6. 최적화된 Buforin IIb 유도체 제작 및 항암효과 검증 14
7. 항암 펩타이드의 대량생산법 구축 14
제2장 국내외 기술개발 현황 15
제3장 연구개발수행 내용 및 결과 16
제1절 항암 펩타이드 buforin IIb 16
1. 항암 펩타이드 buforin IIb의 아미노산 서열과 구조 16
제2절 항압 펩타이드 buforin IIb의 항암력 측정 18
1. 항암 펩타이드 buforin IIb의 in vitro cytotoxicity assay 18
2. 항암 펩타이드 buforin IIb의 in vivo antitumor assay 21
제3절 Buforin IIb의 암세포 투입기작 규명 23
1. 항암 펩타이드 buforin IIb가 처리된 암세포의 FACS 분석 23
2. Buforin IIb와 세포표면성분과의 반응 25
제4절 Buforin IIb의 암세포내 세포사멸기작 규명 27
1. Buforin IIb의 암세포내 결합단백질의 규명 27
2. Buforin IIb의 DNA, RNA 결합특성여부 분석 28
3. Buforin IIb의 treatment에 따른 암세포내 단백질 발현양상 분석 29
4. Buforin IIb의 암세포내 apoptosis 관련 여부 규명 32
5. Buforin IIb에 의해 유도되는 apoptosis pathway의 규명 35
제5절 최적화된 buforin IIb 유도체 설계 및 제작과 항암 효과의 검증 37
1. Buforin IIb의 유도체 합성 37
2. Buforin IIb 유도체들을 이용한 항균력 측정 39
3. Buforin IIb 유도체들의 작용부위 40
4. Buforin IIb 유도체들의 세포독성 연구 42
5. 항암 펩타이드 buforin IIb 유도체들의 in vitro anticancer assay 43
6. 항암 펩타이드 buforin IIb 유도체들의 in vivo anticancer assay 45
제6절 Buforin IIb 및 유도체의 대량생산방법 구축 46
제4장 목표달성도 및 관련분야에의 기여도 51
제1절 계획 대비 달성도 51
제2절 관련 분야에의 기여도 53
(1) 연구개발의 최종목표 54
(2) 연차별 연구개발 목표 및 내용 54
(3) 계획대비 달성도 55
(4) 위 연구목표(총연구기간)에서 중요도 순으로 5-6개 목표 추출 및 가중치 부여 57
제5장 연구개발결과의 활용계획 58
제6장 연구개발과정에서 수집한 해외과학기술정보 59
제7장 참고문헌 60
수정 / 보완 대비표
주의
표 1. 부포린과 부포린 유도체의 아미노산 서열 17
표 2. 60개의 인간암세포주에 대한 buforin IIb의 항암력 측정 20
표 3. HeLa proteins identified by MALDI-TOF 31
표 4. Buforin IIb와 유도체들의 아미노산 서열 38
표 5. Buforin IIb와 유도체들의 항균력 테스트 39
표 6. Buforin IIb 유도체들의 hemolytic activity 측정 42
그림 1. 3개의 α-helical RLLR repeats의 helical wheel diagram(A)과 buforin IIb의 helical wheel diagram(B).... 17
그림 2. Buforin IIb와 magainin G의 in vitro 항암력 측정.... 19
그림 3. Buforin IIb와 in vivo상의 항암력 측정.... 21
그림 4. 종양 이식 쥐를 이용한 Buforin IIb와 in vivo 항암력 측정.... 22
그림 4. FACS analysis와 confocal fluorescence microscopic images.... 24
그림 5. Buforin IIb를 처리한 암세포의 생존률과 FACS 분석.... 26
그림 6. Buforin IIb 결합 단백질의 Western blot analysis.... 27
그림 7. Buforin IIb의 DNA와 RNA에 대한 Gel retaldation assay.... 28
그림 8. 12 ㎍/ml의 Buforin IIb이 처리되지않은 HeLa cell proteins(A)과 Buforin IIb가 처리된 HeLa cell proteins(B)의 2D images.... 30
그림 9. Buforin IIb를 처리한 Jurkat cells의 DNA fragmentation.... 33
그림 10. Annexin V FITC/PI로 labeling 한 buforin IIb가 처리된 Jurkat cells의 FACS analysis.... 34
그림 11. (A) Western blot analysis of caspases and PARP activation in HeLa cells.... 36
그림 12. Mechanism of action of buforin IIb and its analogs.... 41
그림 13. Buforin IIb 유도체들의 항암력 측정... 44
그림 14. 항암 펩타이드 buforin IIb 유도체들의 in vivo anticancer assay.... 45
그림 15. Multimeric expression system을 위한 벡터 제작.... 47
그림 16. 항암 펩타이드 buforin IIb의 histonin II의 중합화과정.... 48
그림 17. Multimeric histonin II의 크기 확인.... 49
그림 18. Multimeric histonin II gene의 발현 확인.... 50
그림 19. 재조합 histonin II의 순수 분리.... 50
